紅細胞裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法,它能既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。
裂解液作用原理:
血紅細胞表面上有紅細胞專屬的表面抗原,當裂解液中含可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的時候就只會造成紅細胞的變形,生物通道擴大膨脹裂解,或者引起紅細胞的變形,而不會攻擊其他細胞。
另外紅細胞有自己的電負性,滲透脆性(通常是一些非酶細胞裂解液的突破點),懸浮穩定性,這都是區別于其他種類細胞的區別點。裂解液就是利用這些特性裂解紅細胞的。另外裂解液不能達到100%準確的裂解紅細胞,總會或多或少導致其他種類細胞的裂解。
紅細胞裂解液的配置方法:
取100μl抗凝全血,加2ml應用液3#,混勻15~20s;加2ml應用液2#,混勻15~20s;加4ml應用液1#,混勻15~20s;300×g離心2min,棄上清;收集沉淀,加PBS緩沖液,制成白細胞懸液,備用。(這種紅細胞裂解法滿足了白細胞流式細胞儀檢測分選要求,價格低廉,是一種簡便快捷、經濟實用的白細胞純化分選方法。)
紅細胞裂解液保存方法:
1、10x儲存液儲存于2-8°C不能超過半年(六個月);
2、使用時根據需要稀釋,每次用都應用去離子水新鮮配制工作液,當日用不完的可廢棄。