品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一周 |
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應用領域 | 醫療衛生,食品,生物產業,農業,制藥 |
Annexin V-FITC / PI雙染凋亡檢測試劑盒
Annexin V-FITC / PI雙染凋亡檢測試劑盒
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸PS有高度親和力,可通過細胞外側暴露的PS與凋亡早期細胞胞膜結合,將Annexin V標記熒光染料,利用流式細胞儀檢測細胞凋亡。 細胞核染料(PI,DAPI,7-AAD)可與雙鏈DNA特異性結合,并產生強烈的熒光,正常情況下無法透過細胞膜。由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性,DAPI可進入細胞內對DNA進行染色,與Annexin V搭配使用,可區分處于不同凋亡時期的細胞。
實驗操作指南步驟
一步法
1.細胞按照實驗方案進行凋亡誘導,300 g 離心 5 min,棄上清,收集細胞,PBS 洗滌一次,輕輕重懸細胞并計數。注:本品僅在懸浮培養的細胞中驗證,良好的細胞狀態是實驗的關鍵。貼壁生長的細胞用于凋亡檢測時,可能會因為胰酶消化、吹打等處理導致細胞的壞死或凋亡,對實驗結果可能存在不可控的影響,請謹慎處理。
2.取 1~5 × 105重懸的細胞,300 g 離心 5 min,棄上清。用 PBS 洗滌細胞一次,離心后棄上清,加入 500 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重懸細胞。
3.細胞懸液中加入 5 μL 的 Annexin V-FITC 和 5 μL 的 PI 染色液。
4.輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育 15~20 min。
5.反應完成后立即上機檢測。如不能及時檢測,請于冰上避光靜置并于 1 小時內完成檢測。注:a)流式細胞儀檢測請取陰性樣本(如未經藥物處理的活細胞)進行 Annexin V-FITC 和 PI 雙染,作為陰性對照;另取陽性樣本(如毒性藥物處理的細胞)分別進行 Annexin V-FITC 和 PI 單染,作為調節熒光補償的單陽對照。b)流式細胞儀檢測時 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道,PI 優先選擇 PerCP/Cy5.5 通道,其次是 ECD 通道。
兩步法
1.細胞按照實驗方案進行凋亡誘導,300 g 離心 5 min,棄上清,收集細胞,PBS 洗滌一次,輕輕重懸細胞并計數。注:本品僅在懸浮培養的細胞中驗證,良好的細胞狀態是實驗的關鍵。貼壁生長的細胞用于凋亡檢測時,可能會因為胰酶消化、吹打等處理導致細胞的壞死或凋亡,對實驗結果可能存在不可控的影響,請謹慎處理。
2.取 1~5 × 105重懸的細胞,300 g 離心 5 min,棄上清。用 PBS 洗滌細胞一次,離心后棄上清,加入 100 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer 工作液重懸細胞。
3.細胞懸液中加入 2.5 μL 的 Annexin V-FITC 和 2.5 μL 的 PI 染色液。(由于兩步法分辨率更高,染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果;用戶亦可根據自己的模型進行滴定后加入適量的染色液,用更少的量獲得高質量的結果。)4.輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育 15~20 min。
5.加入 400 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer,混勻樣本。
6.立即上機檢測。如不能及時檢測,請于冰上避光靜置并于 1 小時內完成檢測。注:a)流式細胞儀檢測請取陰性樣本(如未經藥物處理的活細胞)進行 Annexin V-FITC 和 PI 雙染,作為陰性對照;另取陽性樣本(如毒性藥物處理的細胞)分別進行 FITC 和 PI 單染,作為調節熒光補償的單陽對照。b)流式細胞儀檢測時 Annexin V-FITC 可用 FITC 通道,PI 優先選擇 PerCP/Cy5.5 通道,其次是 ECD 通道。
Annexin V-FITC / PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒 |
Annexin V-FITC / 7-AAD熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒 |
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Annexin V-ER780 / DAPI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒 |